lumiprobe ProteOrange 蛋白質定量試劑盒說明書

ProteOrange 蛋白質定量試劑盒

該蛋白質定量試劑盒的核心是一種非常靈敏的 ProteOrange 熒光染料。該染料適用于熒光分光光度計和酶標儀。該試劑盒針對蛋白質定量進行了優化，最終溶液中蛋白質的檢測水平低至 10 ng/mL。

ProteOrange 蛋白質定量試劑盒  

帶有熒光染料的 ProteOrange 試劑盒允許以比分光光度法和其他用于蛋白質定量的常規方法（Lowry，Bradford，BCA）更高的靈敏度進行蛋白質定量。

ProteOrange 試劑是試劑盒的關鍵成分，其游離形式幾乎沒有熒光。在溶液中，它與蛋白質分子形成復合物，并在與蛋白質結合時表現出增加的熒光。ProteOrange 在與蛋白質的復合物中的激發最大值在 ~485 nm，發射最大值在 ~590 nm。該試劑盒可與任何具有合適激發源和檢測通道的熒光計一起使用。一般來說，所測蛋白質濃度的工作范圍受設備靈敏度的限制。對于比色皿熒光計，推薦的可測量濃度范圍為 10 ng/mL 至 10 µg/mL，對于平板熒光計，推薦濃度范圍為 100 ng/mL 至 10 µg/mL。

該試劑盒包含 ProteOrange 熒光染料、用于制備染料工作溶液的緩沖液和蛋白質濃度標準品（BSA，2 mg/mL）。為了量化測試蛋白質，制備染料工作溶液并用它來稀釋測試樣品和已知蛋白質濃度的樣品以生成校準曲線。使用來自試劑盒的牛血清白蛋白或（如果有）與測試樣品中相同的實驗蛋白質制備蛋白質濃度標準。在 95°C 下孵育準備好的樣品 10 分鐘以使蛋白質變性，讓它們冷卻至室溫并測量熒光強度。

根據樣品體積，測量次數從 200（標準熒光比色皿的樣品體積 2.5 mL 和分析體積 2 mL）到 2000（96 孔板的樣品體積 250 µL 和分析體積 200 µL）不等。