選擇抗生素：內毒素檢測，無菌試劑

殺稻瘟素是一種有效的選擇抗生素，可作用于真核細胞和原核細胞。 

殺 稻瘟素是一種從灰色產色鏈霉菌中分離的肽基核苷抗生素，通過干擾核糖體機制中的肽鍵形成來抑制蛋白質合成。

對殺稻瘟素的抗性是由蠟狀芽孢桿菌(bsr)的殺稻瘟素抗性基因賦予的，該基因編碼殺稻瘟素-S 脫氨酶 [1]。
來自鏈輪菌[2] 的殺稻瘟素S 乙酰轉移酶基因 (bls)和來自土曲霉[3]的殺稻瘟素 S 脫氨酶基因 (BSD)也賦予了對殺稻瘟素的抗性。

通常，哺乳動物細胞對 1-10 µg/ml 的殺稻瘟素濃度和細菌對 25-100 µg/ml 的濃度敏感。
由殺稻瘟素誘導的細胞死亡迅速發生，允許在一周內選擇攜帶殺稻瘟素抗性基因的轉染細胞系。 

參考：

1. Izumi M. 等人，1991. 殺稻瘟素 S 抗性基因 (bsr)：哺乳動物細胞的新選擇標記。Exp.Cell Res.197:229-33。
2. Perez-Gonalez J. 等人，1990 年。編碼來自鏈輪菌屬的殺稻瘟素 S 乙酰轉移酶的基因的克隆和表征。基因。86:129-34。 
3. Kimura M. 等人，1994. 土曲霉 (BSD) 中的殺稻瘟素 S 脫氨酶基因：一種用于轉染哺乳動物細胞的新耐藥基因。生物化學。生物物理學。學報。1219:653-9。

圖

殺稻瘟素

規格

產品濃度： 10 mg/ml

質量控制：每個批次都經過*測試，以確保沒有批次間的差異。

純度： ≥ 95% (HPLC)

內毒素水平： < 1 EU/mg

理化特性： pH值、外觀

細胞培養測試：在殺稻瘟素敏感和抗稻瘟素的哺乳動物細胞系中驗證了效力

痕量污染物的非細胞毒性：在殺稻瘟素抗性細胞中證實沒有長期影響

內容

殺稻瘟素鹽酸鹽以無菌過濾溶液的形式提供，濃度為 10 mg/ml，溶于 HEPES 緩沖液。

該產品有四種包裝尺寸：

• ant-bl-05：  5 x 1 毫升（50 毫克）

• ant-bl-1： 10 x 1 毫升（100 毫克）

• ant-bl-5： 50 x 1 毫升（500 毫克）

• ant-bl-5b： 1 x 50 毫升（500 毫克）

殺稻瘟素鹽酸鹽也以粉末形式提供：

• ant-bl-10p： 1 克（粉末）

殺稻瘟素在室溫下運輸。
收到后應在 4°C 或 -20°C 下儲存。
殺稻瘟素是一種有害化合物。有關操作說明，請參閱安全數據表。

細節

工作濃度

用于哺乳動物細胞系的殺稻瘟素的工作濃度從 1 到 10 μg/ml 不等，在少數情況下可達 30 μg/ml。
在開始實驗中，我們建議確定殺死宿主細胞系所需的最佳抗生素濃度。
處理后，細胞死亡迅速發生，允許在轉染后短短 7 天內選擇帶有bsr或 BSD 基因的質粒的轉染細胞。
下面列出了在哺乳動物細胞的一些例子中選擇的殺稻瘟素的建議濃度。

參考：

1. Dorgham K. 等人，2009 年。一種具有抗炎活性的工程化 CX3CR1 拮抗劑。J Leukoc 生物學。86（4）：903-11。
2. Le Bon L. 等人，2014 年。邊緣蛋白調節 Notch-配體順式和反式相互作用以信號狀態。eLife Sci，3：e02950。
3. Tomecki R. 等人，2014 年。多發性骨髓瘤相關的 hDIS3 突變導致細胞 RNA 代謝紊亂，并建議 hDIS3 PIN 域作為潛在的藥物靶點。核酸研究。42:1270-90。
4. Edbauer D. 等，2004。nicastrin 和早老素的共表達挽救了 APH-1.J Biol Chem 的功能喪失突變體。279:37311-5。
5. Khandelia P. 等人，2011 年。用于培養哺乳動物細胞中短發夾 RNA 干擾和轉基因的流線型平臺。PNAS 108:12799-804。
6. Lee HK.et al., 2007. β-內酰胺酶互補在 Toll 樣受體信號抑制劑的高通量篩選中的應用。摩爾藥學。72:868-75。
7. Matsumoto G. 等人，2011。p62/SQSTM1 的絲氨酸 403 磷酸化調節泛素化蛋白的選擇性自噬清除。摩爾細胞。44:279-89。
8. Schepetkin IA。et al., 2009. 從 Epilobium angustifolium 中分離的 oenothein B 的免疫調節活性。J免疫學。183:6754-66。

常見問題

殺稻瘟素的儲存方法是什么？
殺稻瘟素在室溫下運輸。收到后，應在 4°C 下短期儲存或在 -20°C 下長期儲存。避免重復的凍融循環。有效期在產品標簽上注明。
殺稻瘟菌素溶液打開后，可在 -20°C 下保持穩定 1 年，避免重復凍融循環，如果保存在無菌條件下，可在 4°C 下保存 3 個月。
具體而言，對于殺稻瘟素粉末，原液濃度必須為 10 mg/ml，等分試樣可在 -20°C 下保存 1 年。請注意，如果等分試樣的濃度低于 10 mg/ml，我們無法保證產品的穩定性。重要的是，避免重復的凍融循環。

殺稻瘟素在哺乳動物細胞中的選擇濃度是多少？
用于哺乳動物細胞系的殺稻瘟素的工作濃度在 1 - 10 μg/ml 之間變化，少數報道的案例高達 30 μg/ml。在初始實驗中，我們建議確定殺死宿主細胞系所需的殺稻瘟素的最佳濃度。
有關更多詳細信息，請參閱該產品的技術數據表。

大腸桿菌中殺稻瘟素的選擇濃度是多少？
殺稻瘟素在大腸桿菌中的活性較低，但可以在補充有 100 μg/ml 殺稻瘟素的低鹽 LB 瓊脂培養基 (pH 8) 上選擇對殺稻瘟素有抗性的轉化體。
請注意：高 pH 值（即 8）會增強殺稻瘟素的活性。