套件內容清單：

TGIRT 試劑盒內容（10 次反應或 25 次反應）：

TGIRT ® -III酶，1×10米升（KTGIRT-10）或3×10米升（KTGIRT-25）

10X引物混合物50米升（PM-110）

10 x DTT，50毫升(D-121)

5 x 反應緩沖液，100毫升(RX-120)

• 該試劑盒包括TGIRT ® -III 酶、RNA 和 DNA 寡核苷酸的混合物，可退火形成 R2 RNA/R2R DNA 異源雙鏈體，其中包含第一個接頭序列、二硫蘇糖醇 (DTT)和反應緩沖液以進行 TGIRT ®模板- Illumina RNA-seq 和 ssDNA-seq 分析的轉換反應。7,8,9,10,12該試劑盒能夠合成 RNA 模板的 cDNA 拷貝，其中第一個 RNA-seq 接頭與 cDNA 的 5' 末端無縫連接。對于 RNA-seq 文庫構建，DNA 寡核苷酸（單獨購買）包含在PCR 擴增之前，必須使用耐熱 5'AppDNA/RNA 連接酶（新英格蘭生物實驗室；M0319S 或 M0319L）將第二個 RNA-seq 接頭序列添加到 cDNA 的 3' 末端。

我可以做哪些實驗？

1. 全面的鏈特異性轉錄組分析。8

2. 全細胞、外泌體、血漿和其他無細胞 RNA 的 RNA-seq。7、8、15

3. miRNA、tRNA 和其他小的非編碼 RNA 的分析。1-9,12,15

4. RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP 和 CRAC，??用于表征 RNA-蛋白質相互作用和核糖體分析。1,10,115。

5. 通過高通量測序鑒定 RNA 堿基修飾。4、5、13、14

6. 單鏈 DNA 序列。16

7. FFPE腫瘤樣本分析（咨詢InGex技術支持）。

這就是您應該使用 TGIRT 的原因：

• 比逆轉錄病毒逆轉錄酶具有更高的熱穩定性、持續合成能力和保真度，允許從高度結構化和/或高度修飾的 RNA（例如，tRNA）和含有富含 GC 重復擴增的 RNA 合成全長、端到端的 cDNA。1-9,12,15,17
• 新穎的端到端模板切換活動，可以在逆轉錄過程中連接 RNA-seq 或 PCR 接頭，并且無需單獨的加尾或 RNA 3'-接頭連接步驟。1這種模板轉換活動大大地促進了鏈特異性 RNA-seq 文庫的構建，與使用隨機六聚體引物或使用 RNA 連接酶進行接頭連接的程序相比，偏差更小。1,7,8
• 能夠從低至 2 ng 的 RNA 輸入生成全面的配置文件。7,15
• 從 RNA 模板到 PCR 產物的 RNA-seq 文庫構建耗時不到 5 小時。7、8、15

TGIRT 更適合通過 TGIRT 模板切換構建 RNA-seq 文庫：

1. 全面的鏈特異性轉錄組分析。

與非鏈特異性 TruSeq v2 相當且優于鏈特異性 Tru-Seq v3，TGIRT®-seq 的 ribodepleted、碎片化通用人類參考 RNA 樣本概括了人類轉錄本和摻入的相對豐度。TGIRT®-seq 明顯比 TruSeq v3 更具鏈特異性，并消除了 TruSeq 固有的隨機六聚體引發的采樣偏差。與 TruSeq 相比，TGIRT®-seq 顯示出更均勻的 5' 到 3' 基因覆蓋并識別出更多的剪接點。TGIRT®-seq 能夠同時分析同一 RNA-seq 中的 mRNA 和 lncRNA 作為結構化的小 ncRNA，包括 TruSeq 數據集中基本上不存在的 tRNA。8

2. 人類全細胞、外泌體、血漿和其他細胞外 RNA 的 RNA-seq。

快速處理時間（通過 PCR 步驟構建 RNA-seq 文庫<5 小時）；需要少量 RNA（低 ng 范圍）；全面的轉錄譜，包括 mRNA 和 lncRNA 以及小 ncRNA，包括 tRNA、pre-miRNA 和其他結構化小 ncRNA 的全長讀數；不需要RNA連接酶；與傳統方法相比，偏差更少、效率更高、鏈特異性更高。7、8、15

3. 高度結構化和/或高度修飾的 RNA 模板的 RNA-seq。

更高的熱穩定性、持續合成能力和鏈置換使得獲得 tRNA 和其他結構化/修飾的小 ncRNA 的全長、端到端 cDNA 成為可能，這些 ncRNA 對逆轉錄病毒 RT 具有抵抗力。4-9,12-15。

4. 在 RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖體分析等方法中，通過 TGIRT® 模板切換構建 RNA-seq 文庫。

快速處理時間（通過 PCR 步驟構建 RNA-seq 文庫<5 小時）；需要少量 RNA（低 ng 范圍）；不需要 RNA 連接酶，程序中的步驟更少，偏差更小，效率更高。1,10,11

5. 人血漿和大腸桿菌 基因組DNA 的ssDNA-seq 。

通過直接在 DNA 鏈的 3' 末端啟動 DNA 合成，同時連接 DNA-seq 接頭，無需末端修復、拖尾或連接，從而以更簡單的工作流程捕獲精確的 DNA 末端。能夠分析核小體定位、轉錄因子結合位點、DNA 甲基化位點和起源組織。