agilent PB31 RPE 和 PB32 RPE的區(qū)別 藻膽蛋白常見問題解答 (FAQ)

我想在活化或無菌過濾等操作之前對 PB20 APC 的 60% 硫酸銨懸浮液進(jìn)行脫鹽。我可以將懸浮液稀釋后用離心柱脫鹽嗎？

我們不建議使用離心脫鹽柱，因?yàn)樗鼈兊姆蛛x度不足以*去除銨離子。我們建議采用以下任意選項(xiàng)進(jìn)行脫鹽： 1. 在 PBS 或您選擇的緩沖液中透析 APC（每天至少更換幾次緩沖液，以確保銨離子*交換）。可以使用標(biāo)準(zhǔn)透析管、商用透析盒，完整 APC 的分子量約為 100 kDa。 2. 使用 GE 公司的 PD-10 柱等色譜柱進(jìn)行脫鹽。在這種情況下，在裝載至色譜柱之前 APC 應(yīng)進(jìn)行離心（和丟棄無色上清液），沉淀團(tuán)塊應(yīng)*復(fù)溶于 PBS（或您選擇的緩沖液）中。如果時(shí)間是考察因素之一，此步驟也可用于快速啟動上面的透析選項(xiàng)。為了確保脫鹽*，建議樣品體積不要超過柱床體積的 10%。

我有一款購自 Turner Designs 的熒光計(jì)，專門用于以 PB11 C-藻藍(lán)蛋白作為校準(zhǔn)標(biāo)樣的應(yīng)用。安捷倫有相關(guān)校準(zhǔn)方案嗎？

我們沒有使用 PB11 進(jìn)行儀器校準(zhǔn)的特定方案，但 Turner Designs 公司應(yīng)該能夠?yàn)槟峁椭２贿^，我們可以為您提供一些操作建議。我們建議您僅從樣品瓶中取用您所需量的樣品，其余未稀釋的部分在 4 °C 下避光儲存于原硫酸銨制劑緩沖液中。雖然 PB11 可以在水中稀釋，但這并不是良好的儲存方式。 PB11 經(jīng)水或 PBS 稀釋后不太穩(wěn)定，因此每次只能稀釋一次校準(zhǔn)所需的量，即每次校準(zhǔn)都應(yīng)使用新鮮配制的 PB11 稀釋液。因?yàn)橄♂屢簩⒂尚迈r物料制成，所以可以使用水。由于 PB11 的濃度很小，因此在稀釋前無需為去除硫酸銨對物料進(jìn)行透析。需要重點(diǎn)注意的是，在將任何物料從原裝容器中移出并進(jìn)行稀釋之前，必須充分混合 Pb11。我們的 PB11 的濃度規(guī)格為 ≥ 10 mg/mL，但通常我們供應(yīng)的濃度更高。濃度值列在分析證書上。

安捷倫有關(guān)于 PB40-PerCP 與抗體或其他蛋白質(zhì)偶聯(lián)的方案嗎？

PB40-PerCP 可以與蛋白質(zhì)偶聯(lián)，但必須用 SMCC 進(jìn)行活化。緩沖液將 PerCP 交換到 PBS 中，并用 NHS-SMCC 活化（比例可能需要優(yōu)化）。由于活化 PerCP 的保質(zhì)期很短，我們建議您只活化您所需量的偶聯(lián)物料。因此，我們不提供 PerCP 偶聯(lián)試劑盒，或像 RPE 和 APC 一樣將活化的 PerCP 作為獨(dú)立產(chǎn)品提供。抗體偶聯(lián)的一個(gè)合理起點(diǎn)為 1 mg SMCC 活化的 PerCP:1 mg Ab，但這需要針對您的特定目標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化。對于一般的偶聯(lián)方案，我們的 PJ31K RPE 偶聯(lián)試劑盒對所用的步驟和試劑進(jìn)行了詳細(xì)介紹。一些單克隆抗體可能在 DTT 還原后沉淀，例如 PJ31K 方案。使用 SPDP/TCEP 的替代方案可能適用于在 DTT 中表現(xiàn)不佳的抗體，我們的替代偶聯(lián)方案技術(shù)簡報(bào)中提供了相關(guān)信息。

安捷倫網(wǎng)站以往的產(chǎn)品 PB31 RPE 和 PB32 RPE+ 有什么區(qū)別？

PB32 與 PB31 是由相同的類紫菜藻菌株產(chǎn)生的，但前者經(jīng)過額外的純化步驟去除游離的 RPE 亞基。我們認(rèn)為 PB32 是一種合適的 PB31 替代物，在偶聯(lián)應(yīng)用中可能提供更好的結(jié)果。但是，如果您更傾向于使用 PB31，

如何測量 RPE 的濃度？

如何測量 RPE 的濃度？

我們在 566 nm 處測量 RPE 的濃度。將 λmax (566 nm) 處的吸光度乘以 10，再除以消光系數(shù) (82)，得到 RPE 的濃度 (mg/mL)。 RPE 濃度 (mg/mL) = （A566 測量值 × 10）/82 我們將 λmax 處的消光系數(shù)作為 E1%，即 1% 溶液 (10 mg/mL) 在 1 cm 光程的比色皿中的吸光度。然而，許多我想在活化或無菌過濾等操作之前對 PB20 APC 的 60% 硫酸銨懸浮液進(jìn)行脫鹽。我可以將懸浮液稀釋后用離心柱脫鹽嗎？我有一款購自 Turner Designs 的熒光計(jì)，專門用于以 PB11 C-藻藍(lán)蛋白作為校準(zhǔn)標(biāo)樣的應(yīng)用。安捷倫有相關(guān)校準(zhǔn)方案嗎？安捷倫有關(guān)于 PB40-PerCP 與抗體或其他蛋白質(zhì)偶聯(lián)的方案嗎？安捷倫網(wǎng)站以往的產(chǎn)品 PB31 RPE 和 PB32 RPE+ 有什么區(qū)別？如何測量 RPE 的濃度？科學(xué)家已經(jīng)習(xí)慣于觀察 1 mg/mL (0.1%) 蛋白質(zhì)的消光系數(shù)。對于 RPE，即為 1 mg/mL 溶液的 A566 吸光度值 8.2，它的計(jì)算公式更為簡單： RPE 濃度 (mg/mL) = A566 測量值/8.2 我們用分光光度法而不是熒光法測量濃度。有關(guān)計(jì)算藻膽蛋白濃度和摩爾濃度的更多信息，請參閱安捷倫偶聯(lián)評估技術(shù)簡報(bào)。

我想在活化或無菌過濾等操作之前對 PB32 RPE 的 60% 硫酸銨懸浮液進(jìn)行脫鹽。我可以將懸浮液稀釋后用離心柱脫鹽嗎？

我們不建議使用離心脫鹽柱，因?yàn)樗鼈兊姆蛛x度不足以*去除銨離子。我們建議采用以下任意選項(xiàng)進(jìn)行脫鹽： 1. 在 PBS 或您選擇的緩沖液中透析 RPE（每天至少更換幾次緩沖液，以確保銨離子*交換）。可以使用標(biāo)準(zhǔn)透析管、商用透析盒，完整 RPE 的分子量約為 240 kDa。 2. 使用 GE 公司的 PD-10 柱等色譜柱進(jìn)行脫鹽。在這種情況下，在裝載至色譜柱之前 RPE 應(yīng)進(jìn)行離心（和丟棄無色上清液），沉淀團(tuán)塊應(yīng)*復(fù)溶于 PBS（或您選擇的緩沖液）中。如果時(shí)間是考察因素之一，此步驟也可用于快速啟動上面的透析選項(xiàng)。為了確保脫鹽*，建議樣品體積不要超過柱床體積的 10%。