€805.00
酶免疫測(cè)定法測(cè)定大腸桿菌 BL21（DE3）細(xì)胞系中的HCP 。
起動(dòng)裝置為客戶提供了所有必要的組件，可以快速，輕松地為特定過(guò)程選擇合適的套件類型（A或D）。
入門套件包括四個(gè)完整的即用型套件：
1x A型，1x D型
每種套件類型包含：
1預(yù)期用途
提供的Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒是一種夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，將以微測(cè)試板形式進(jìn)行。
本試驗(yàn)用于大腸桿菌宿主Ecoli-HCP的體外定量測(cè)定。
細(xì)胞蛋白）重組生產(chǎn)過(guò)程中的相關(guān)樣品
各自的Ecoli細(xì)胞系。
該試劑盒包含執(zhí)行HCP酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)所需的所有試劑。
測(cè)定范圍包括2 ng/ml到100 ng/ml的Ecoli HCP的初步工作范圍。
2.試劑盒中提供的試劑和材料
3.所需但不隨套件提供的材料和設(shè)備
•超純水（至少雙蒸餾質(zhì)量），用于稀釋洗滌緩沖液（10x）
•吸水紙巾，用于去除微試板清洗后的殘留液體。
•用于制備標(biāo)準(zhǔn)、控制和樣品的合適反應(yīng)管
•適合洗滌緩沖液的容器
•適用于有效多通道移液的試劑庫(kù)
•培養(yǎng)過(guò)程中覆蓋微型測(cè)試板的蓋子
•軌道微測(cè)試板振動(dòng)篩（約500轉(zhuǎn)/分）和渦流混合器
•微型測(cè)試板清洗機(jī)（也可以手動(dòng)清洗）
•精密移液管（體積可調(diào)，從10微升到5000微升），帶有合適的
•多通道移液管（100μl），帶有合適的
•用于在450 nm（參考波長(zhǎng)620）下測(cè)量光密度的微型板閱讀器-
690牛米）
4試劑的儲(chǔ)存
所有提供的試劑（1到8）應(yīng)在2-10°C下冷藏，并在使用前使用。
到期日期。
5試驗(yàn)原理
Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是基于96孔微試板的夾心酶免疫分析。
（1X8F條格式）?？赡芎蠩coli-HCP雜質(zhì)的樣品在微型測(cè)試板中培養(yǎng)。
預(yù)先涂有多克隆山羊Ecoli-HCP特異性捕獲抗體和不同Ecoli-HCP標(biāo)準(zhǔn)濃度孵育后校準(zhǔn)曲線及平板
去除未結(jié)合成分的洗滌步驟，一種特定的生物素結(jié)合Ecoli-HCP特異性加入檢測(cè)抗體，進(jìn)一步洗滌后，結(jié)合檢測(cè)抗體依次與酶結(jié)合物（鏈霉親和素結(jié)合過(guò)氧化物酶）作為示蹤劑反應(yīng)。
洗滌步驟，以四甲基聯(lián)苯胺（TMB）為酶底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。產(chǎn)生藍(lán)色。在底物培養(yǎng)時(shí)間結(jié)束時(shí)，反應(yīng)被加入硫酸，將藍(lán)色變?yōu)辄S色，測(cè)量光密度。
在450 nm（參考波長(zhǎng)620-690 nm）波長(zhǎng)下進(jìn)行光度測(cè)量。
井內(nèi)密度與井內(nèi)Ecoli-HCP濃度成正比。
根據(jù)相應(yīng)的Ecoli-HCP計(jì)算未知樣品的濃度。
校準(zhǔn)曲線。
警告和注意事項(xiàng)
-本試劑盒僅用于體外研究，只能由合格人員使用。
-開(kāi)始分析前，仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。
-注意批號(hào)和有效期。不要混合不同批次的試劑。不要使用過(guò)期的。
試劑。
-遵循良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐和安全指南。穿著實(shí)驗(yàn)室外套、一次性手套和
必要時(shí)戴防護(hù)眼鏡。
-試劑盒中的某些試劑含有Proclin®300作為防腐劑。這些試劑可能會(huì)腐蝕眼睛。
以及皮膚刺激，應(yīng)小心處理。如果接觸到眼睛或皮膚，
立即用水沖洗。
-儲(chǔ)存避光底物溶液。
-停止溶液由0.5摩爾硫酸組成。該試劑具有腐蝕性，可能導(dǎo)致
眼睛和皮膚有刺激性。應(yīng)小心處理。如果接觸到眼睛或皮膚，
立即用水沖洗。
-剩余的試劑盒試劑和準(zhǔn)備好的溶液必須被視為潛在危險(xiǎn)。
根據(jù)國(guó)家的安全指南和法規(guī)進(jìn)行廢物處理。
7樣品處理和儲(chǔ)存
工藝衍生樣品中HCP的穩(wěn)定性尚未得到研究，因此，樣品
應(yīng)冷藏（2°-10°C）或冷凍（等于或低于-20°C），具體取決于
樣品中重組產(chǎn)物的溫度要求。一般來(lái)說(shuō)，反復(fù)凍結(jié)/
應(yīng)避免樣品解凍。
8試劑制備
8.1清洗緩沖液的制備（1X）
使用前用超純水（例如100 ml 10x）稀釋洗滌緩沖液10x（2）1:10
用900毫升超純水濃縮，洗滌液（1X）在室內(nèi)穩(wěn)定。
溫度，可在準(zhǔn)備日后使用兩周。
8.2編制Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)
本試劑盒中提供的HCP標(biāo)準(zhǔn)是由Ecoli菌株制備的主標(biāo)準(zhǔn)。
BL21或W3110細(xì)胞溶解物，調(diào)節(jié)主標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)濃度。
基于Bradford蛋白質(zhì)法。
Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)濃度應(yīng)根據(jù)
在進(jìn)行分析之前，試劑盒中相應(yīng)的Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)（4）。
Ecoli 360 HCP Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)B(niǎo)iogenes GmbH版本2018年1月
- 4—
8在包含分析工作的分析緩沖液（3）中制備了ELISA標(biāo)準(zhǔn)品（S1至S8）。
根據(jù)以下稀釋方案，范圍（約2 ng/ml至100 ng/ml Ecoli HCP）。
標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)僅在編制之日使用。
8.3檢測(cè)器抗體工作液（1X）的制備
用分析緩沖液（3）稀釋檢測(cè)器抗體100x溶液（5）1:100，進(jìn)行一次微試驗(yàn)。
將120μl的100x濃縮液與12 ml分析緩沖液混合。此項(xiàng)工作
溶液只能在配制當(dāng)天使用。
8.4酶結(jié)合工作液（1X）的制備
用分析緩沖液（3）稀釋酶偶聯(lián)物100x溶液（6）1:100，進(jìn)行一次微試驗(yàn)。
將120μl的100x濃縮液與12 ml分析緩沖液混合。此項(xiàng)工作
溶液只能在配制當(dāng)天使用。
9樣品制備
如果存在集料，應(yīng)通過(guò)離心去除集料，以確保適當(dāng)
分析性能。一般來(lái)說(shuō)，所有樣品工作稀釋液只能在
準(zhǔn)備工作。
在分析之前，應(yīng)使用分析緩沖液（3）稀釋樣品。小樣品稀釋度
應(yīng)為1:2。每種樣品類型的宜樣品稀釋度必須由用戶確定，
根據(jù)HCP含量，考慮分析工作范圍。
10化驗(yàn)程序
所有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定步驟均在室溫（18-26°C）下進(jìn)行。
使用前，讓試劑盒的所有材料和試劑達(dá)到室溫。
在達(dá)到室溫之前，不要打開(kāi)預(yù)涂微型測(cè)試板（1）的箔袋。
未用于分析的剩余板條應(yīng)重新包裝到袋中
干燥劑。把袋子封緊，以便冷藏。
在所有孵育步驟中，培養(yǎng)皿應(yīng)蓋上蓋子（不隨試劑盒一起提供），以便
防止溶液蒸發(fā)和污染。
1。用標(biāo)準(zhǔn)品和樣品培養(yǎng)：
用100μl/孔的Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)品和分析對(duì)照品以及稀釋液填充平板。
樣品和連續(xù)搖動(dòng)培養(yǎng)2小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)，分析控制和
應(yīng)至少對(duì)樣品進(jìn)行重復(fù)分析。建議使用三種方法。
2。清洗：
去除洗井內(nèi)容物，用250微升/洗井沖洗板4x。
緩沖器（1X）。洗完后，將板倒置，用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄。
吸水紙上的盤子。
三。與檢測(cè)抗體孵育：
用100μl/孔的檢測(cè)抗體工作液（1X）填充平板并孵化。
連續(xù)搖動(dòng)1.5小時(shí)。
4。清洗：
去除洗井內(nèi)容物，用250微升/洗井沖洗板4x。
緩沖器（1X）。洗完后，將板倒置，用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄。
吸水紙上的盤子。
5。與酶結(jié)合物孵育：
用100μl/孔的酶結(jié)合工作液（1X）填充培養(yǎng)板并孵化。
持續(xù)搖晃20分鐘。
6。清洗：
去除洗井內(nèi)容物，用250微升/洗井沖洗板4x。
緩沖器（1X）。洗完后，將板倒置，用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄。
吸水紙上的盤子。
7。用底物溶液培養(yǎng)并停止：
加入100μl/孔的底物溶液（7），用
連續(xù)搖晃。如果15分鐘后顏色發(fā)展太低，則基板
潛伏期可延長(zhǎng)至30分鐘。
直接向板中加入100μl/孔的停止液（8），停止顏色反應(yīng)。
產(chǎn)生黃色產(chǎn)品。
8。測(cè)量：
用多通道顯微板閱讀器測(cè)量450 nm（OD450）處的光密度，并
給出分析的原始數(shù)據(jù)。620 nm到690 nm之間的參考波長(zhǎng)為
推薦。
Ecoli 360 HCP Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)B(niǎo)iogenes GmbH版本2018年1月
- 6—
11計(jì)算
為了生成標(biāo)準(zhǔn)曲線和分析控制和樣品的計(jì)算，平均
對(duì)應(yīng)復(fù)制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的OD450值。
借助適當(dāng)?shù)能浖蓸?biāo)準(zhǔn)曲線，宜使用非線性曲線
四參數(shù)或五參數(shù)方程的回歸模式。
根據(jù)校準(zhǔn)曲線計(jì)算的未知樣品濃度必須乘以
樣品的稀釋系數(shù)。
